抗体技术的明星——重组兔单克隆抗体

抗体是现代生物医学研究和诊断的重要工具，尤其是单克隆抗体（简称单抗），因为其特异性强、重复性高，一直是科研和临床领域的宠儿。然而，传统的单抗制备方法也存在一些局限性。近年来，重组兔单克隆抗体的兴起，为解决这些问题带来了新的可能。

为什么是重组兔单克隆抗体？

重组兔单克隆抗体结合了兔免疫系统的独特优势和现代基因工程技术，具有多方面的优点：

图1:天然兔、鼠、鸡和人免疫球蛋白示意图

兔单克隆抗体的开发的技术路线

目前对于兔单克隆抗体的开发一共有3大技术路线，一是传统的杂交瘤技术平台，该技术筛选的是抗体分泌型浆B细胞（Plasma B cells）； 二是噬菌体展示技术，该技术直接对B细胞进行测序和建库，抗体序列来源可以是浆细胞也可以是记忆细胞（Memory B cells）；三是基于单B细胞直接测序或者基于B细胞体外培养筛选后测序技术，该技术抗体序列来源可以是浆细胞也可以是记忆细胞。

1.杂交瘤技术

小鼠杂交瘤技术依赖于B细胞与骨髓瘤伙伴的细胞融合，自1975年被发现以来，是一种传统的、广泛和最成功地用于生产小鼠单抗的方法(图2)。该方法将免疫小鼠的淋巴细胞与BALB/c小鼠骨髓瘤细胞融合形成永生化杂交瘤细胞，然后对杂交瘤细胞进行筛选，以鉴定产生相同抗体的特定克隆(图2)。

杂交瘤技术是一种成熟的制备鼠源性单抗的方法，并被广泛用于生产各种应用的抗体。然而，由于缺乏合适的骨髓瘤配对，杂交瘤方法大多局限于啮齿动物免疫。在20世纪80年代，一种用于生产治疗性抗体的人类杂交瘤技术被开发出来，这种抗体可以产生天然形式的人类抗体。这种人类杂交瘤技术开发了另一种有用的方法来产生治疗性抗体，而不需要额外的修改。许多研究致力于这项技术，并发现了几个有用的人类融合伙伴细胞系。基于更好的融合伙伴的发展和使用电融合的技术进步，提高了人杂交瘤融合的成功率，这可以在不久的将来推动治疗性抗体的发展。

2.噬菌体展示技术

自20世纪90年代初，噬菌体展示技术被探索为一种新的产生单抗的方法。在这种方法中，从淋巴细胞中获得V基因库，并将VHS和VLS的组合克隆到丝状噬菌体的表面并通过与其外壳蛋白的融合表达(图2)，然后选择在其顶端含有表达特异性单抗的噬菌体颗粒用于常规检测，与实际上仅限于啮齿动物的杂交瘤技术相比，噬菌体展示技术已成功地用于从任何已知免疫球蛋白基因的物种中筛选和分离单抗。2000年，Rader等人首先描述了用噬菌体展示技术筛选兔单抗的全过程，该技术成功地应用于结肠癌免疫治疗靶抗原人A33抗原兔抗体的筛选和人源化，获得的人源化抗体与人A33抗原具有较高的特异性和亲和力。

目前，抗体噬菌体展示技术以其快速、简便的抗体生成和体外控制各种选择参数的能力，是产生用于治疗目的抗体的主要技术平台，根据我们对抗体结构、功能和序列多样性的了解，除了从以前的抗体库中获得的见解外，一种新的合成抗体库技术被开发出来，并通过将精确设计的序列插入到抗原结合位点来用于mAb的生产，这项技术是基于遗传复制免疫球蛋白片段和使用分子生物学技术在体外使抗体副表位多样化而完成的，设计了几个具有多个可变重链和轻链骨架区域的合成抗体库，并用于分离优化的分子识别人单。

3.单B细胞开发技术

尽管杂交瘤筛选与展示技术已被应用于兔源单克隆抗体的生产，但二者均存在局限性：杂交瘤技术存在细胞融合效率低的问题，而展示技术则易导致抗体VH与VL的天然配对丢失。

为克服上述缺陷，单B细胞抗体技术近年来迅速发展（图2C），该技术流程包括：

（1）从外周血或淋巴组织中通过随机分选或FACS鉴定并分离特异性单B细胞；
（2）利用抗体特异性引物进行单细胞逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）；
（3）通过PCR扩增免疫球蛋白（Ig）基因并进行测序；
（4）将Ig基因克隆至表达载体；
（5）在大肠杆菌等原核系统或HEK 293、CHO等真核系统中表达抗体蛋白；
（6）通过蛋白纯化及酶联免疫吸附试验（ELISA）评估抗体活性。

单B细胞抗体技术是高效和稳健的，可以在短时间内从免疫兔中产生大量抗原特异性重组抗体。这种方法已用于产生一些治疗性中和单克隆抗体，用于治疗多种疾病，包括癌症、自身免疫性疾病和传染病，例如，使用单B细胞抗体技术从HIV患者中分离出几种有价值的mAb用于临床诊断。

图2.概述抗原特异性单抗产生的流程图。(A)小鼠杂交瘤方法。(B)噬菌体展示方法。(C)单一B细胞抗体技术。

斯达特重组兔单克隆抗体

重组兔单抗是一种通过基因工程技术，从兔子免疫系统中提取抗体基因，再在体外重组和生产的单克隆抗体。这种方法不同于传统的杂交瘤技术（通常用小鼠来制备抗体），不需要依赖动物细胞直接生产抗体，而是通过精确的基因操作实现抗体的定向设计与制造。斯达特提供重组兔单克隆抗体开发服务，流程中包含了多重特异性筛选，以确保抗体的高度特异性和高亲和力。

重组兔单克隆抗体的技术路线

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杭州斯达特是优宁维旗下品牌，志在为全球生命科学行业提供优质的抗体、蛋白、试剂盒等产品及研发服务。依托多个开发平台：重组兔单抗、重组鼠单抗、快速鼠单抗、重组蛋白开发平台（E.coli,CHO,HEK293,InsectCells）、一步法ELISA平台，PTM泛修饰抗体平台。