HIS标签蛋白,重组人DLK1/FA1蛋白（His标签）是一种重要的跨膜蛋白，参与脂肪形成、神经内分泌分化和干细胞自我更新等生物学过程。本产品为His标签重组蛋白，通过哺乳动物表达系统制备，具有高纯度和生物活性。

HIS标签蛋白,重组人DLK1/FA1蛋白（His标签）
UA011178

产品描述

重组人DLK1/FA1蛋白（Delta Like Non-Canonical Notch Ligand 1/Fetal Antigen 1）是一种重要的跨膜蛋白，参与脂肪形成、神经内分泌分化和干细胞自我更新等生物学过程。本产品为His标签重组蛋白，通过哺乳动物表达系统制备，具有高纯度和生物活性。

产品特性

• 表达系统：哺乳动物细胞表达（保留天然蛋白修饰）

• 蛋白标签：C端6×His标签

• 蛋白形式：可溶性蛋白

• 纯度：>90%（SDS-PAGE检测）

• 分子量：约30-35 kDa（糖基化形式）

• 内毒素水平：<1.0 EU/μg

• 保存条件：-80℃保存（避免反复冻融）

• 缓冲液组成：PBS，pH 7.4

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生物学功能

• 调节脂肪细胞分化

• 影响神经内分泌细胞发育

• 调控干细胞自我更新

• 参与组织再生过程

应用领域

• 脂肪形成机制研究

• 干细胞生物学研究

• 神经内分泌肿瘤研究

• 抗体开发与筛选

• 细胞功能研究

质量控制

• 每批次提供SDS-PAGE纯度检测报告

• 提供Western Blot验证数据

• 严格的活性检测标准

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使用建议

1. 使用前短暂离心

2. 推荐工作浓度：0.1-10 μg/mL

3. 避免反复冻融，建议分装保存

4. 解冻后置于冰上使用

关于斯达特(Starter)，国产抗体专家：
杭州斯达特在为全球生命科学行业提供优质的抗体、蛋白、试剂盒等产品及研发服务。依托多个开发平台：重组免单抗、重组鼠单抗、快速鼠单抗，重组蛋白开发平台 (E.coli,CHO,HEK293,InsectCells)，已正式通过欧盟98/79/EC认证ISO9001认证ISO13485.

HIS标签蛋白是重组蛋白表达中常用的亲和标签，利用其与金属离子（如Ni²⁺、Co²⁺）的螯合作用实现蛋白纯化。以下是典型实验操作流程，涵盖表达、纯化及检测等关键步骤：  

一、实验前准备  

材料与试剂  

表达载体：含目的基因与His标签融合序列的重组质粒。  

宿主菌：常用大肠杆菌，根据载体选择适配菌株。  

试剂：LB培养基、抗生素（如氨苄青霉素、卡那霉素）、IPTG（诱导剂）、结合缓冲液（含咪唑0-20mM，维持蛋白与树脂结合）、洗脱缓冲液（含高浓度咪唑，如200-500mM，竞争性洗脱）、Ni²⁺亲和树脂、PBS缓冲液、蛋白酶抑制剂（如PMSF）等。  

仪器：摇床、离心机、层析柱、超净台、蛋白电泳设备等。  

预实验设计  

确定IPTG诱导浓度（0.1-1mM）、诱导温度（16-37℃）、诱导时间（2-24h），优化表达效率（可选预实验摸索条件）。  

二、His标签蛋白的诱导表达  

转化与筛选  

将重组质粒转化至宿主菌感受态细胞，涂布于含对应抗生素的LB平板，37℃培养过夜，挑取单菌落。  

扩大培养  

挑取单菌落接种至5-10mLLB液体培养基（含抗生素），37℃、200rpm摇床培养至OD₆₀₀=0.6-0.8（对数生长期）。  

诱导表达  

按比例（如1:100）转接至新鲜LB培养基，培养至OD₆₀₀=0.6-0.8后，加入IPTG至终浓度（如0.5mM），设定诱导温度（如37℃诱导4h，或16℃诱导16h，减少包涵体形成）。  

同时设对照组：未诱导的空载体菌和未转化的宿主菌，用于后续蛋白特异性验证。  

三、菌体重悬与破碎  

收集菌体  

诱导结束后，4℃、8000×g离心10分钟，弃上清，收集菌体沉淀。  

用预冷的结合缓冲液（含蛋白酶抑制剂）重悬菌体（按1g菌体：5-10mL缓冲液比例），冰浴放置。  

破碎菌体  

选择合适的破碎方法释放蛋白：  

超声破碎：冰浴条件下，功率200-400W，工作3-5秒，间隔5-10秒，总时间10-20分钟（避免产热导致蛋白变性）。  

高压均质破碎：适用于大规模样品，压力800-1000bar，重复2-3次。  

破碎后，4℃、12000×g离心20分钟，分离上清（可溶性蛋白）和沉淀（包涵体，若需纯化需复性处理）。  

四、亲和纯化  

树脂预处理  

取适量Ni-NTA树脂，用结合缓冲液平衡3-5次（去除保存液，活化树脂），装入层析柱，使树脂自然沉降。  

上样结合  

将离心后的上清缓慢加入层析柱，控制流速（如1mL/min），使His标签蛋白与Ni²⁺充分结合（可重复上样1-2次，提高结合率）。  

收集流穿液（未结合的杂蛋白），用于后续检测。  

洗涤杂蛋白  

用5-10倍柱体积的结合缓冲液（含20-50mM咪唑）洗涤树脂，去除非特异性结合的杂蛋白，收集洗涤液。  

可通过降低咪唑浓度或增加洗涤次数优化纯度（根据杂蛋白结合强度调整）。  

洗脱目的蛋白  

用含200-500mM咪唑的洗脱缓冲液洗脱，分批次收集洗脱液（每管1-2mL），标记序号。  

若需更高纯度，可梯度提高咪唑浓度（如200mM→300mM→500mM），分步洗脱。  

五、蛋白纯度与浓度检测  

SDS-PAGE电泳验证  

取诱导前、诱导后菌液、上清、流穿液、洗涤液、洗脱液各5-10μL，与上样缓冲液混合，煮沸5分钟，进行SDS-PAGE电泳。  

考马斯亮蓝染色后，观察洗脱液中是否出现单一目的条带（根据预测分子量判断），评估纯度。  

蛋白浓度测定  

用BCA法或Bradford法测定洗脱液中蛋白浓度，选择纯度高、浓度高的洗脱组分合并。  

脱盐处理（可选）  

若后续实验需去除咪唑，可通过透析或脱盐柱将蛋白置换至PBS或其他缓冲液中，4℃短期保存或-80℃分装冻存（避免反复冻融）。