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产品型号:UA090032
更新时间:2025-08-12
厂商性质:生产厂家
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小鼠T细胞激活试剂盒
Starter Bio推出的小鼠T细胞激活试剂盒(UA090032)通过创新技术整合,为研究者提供了标准化程度高、可重复性强的实验解决方案。
本试剂盒采用抗体包被磁珠技术,通过精准控制CD3ε(Clone 145-2C11)与CD28(Clone 37.51)抗体的表面包被浓度(分别达到0.5μg/10⁶ beads和1.0μg/10⁶ beads),实现T细胞受体(TCR)与共刺激信号的双重激活。经流式细胞术验证,该技术可使初始T细胞在72小时内达到98%的CD25+CD69+双阳性率,显著优于传统抗体混合刺激法(p<0.01)。
技术参数优势:
磁珠粒径优化:直径4.5μm的顺磁性磁珠通过表面修饰技术,实现抗原呈递面积与细胞结合力的最佳平衡,实验数据显示细胞存活率≥95%(72h培养)
细胞因子协同体系:包含重组小鼠IL-2(20ng/mL工作浓度),其比活性经ELISA验证达≥1×10⁶ IU/mg,有效维持Th1细胞分化
无血清培养体系:采用GMP级培养基配方,避免异源蛋白干扰,支持长达14天的连续扩增培养
在实验应用方面,本试剂盒已通过多中心验证,适用于:
过继性免疫研究中的T细胞扩增
CAR-T细胞制备的预处理阶段
肿瘤微环境中的T细胞耗竭模型构建
免疫检查点抑制剂体外药效评估
产品配套提供经γ射线灭菌的即用型试剂组件,包含:
• 预包被磁珠(2×10⁷ beads/mL)
• 500×细胞因子浓缩液
• 优化基础培养基
• 无菌处理细胞培养板
研究人员可参考随附的标准化protocol(包含梯度激活比例建议与代谢监测方案),在常规CO₂培养箱中即可完成从初始T细胞分离到高纯度效应T细胞获取的全流程操作。经三次冻融循环测试,各组分稳定性符合ICH Q1A标准要求。
使用T细胞激活试剂盒时需严格遵守以下注意事项,以确保实验安全性和结果可靠性:
一、操作规范
无菌操作
全程在生物安全柜中操作,避免微生物污染。
使用无菌耗材(如吸头、管子、培养板等),避免交叉污染。
细胞处理
外周血单核细胞(PBMC)分离需采用密度梯度离心法,避免红细胞或血小板残留。
细胞计数后调整浓度至试剂盒推荐范围(通常为1-2×10⁶cells/mL)。
抗体使用
按说明书比例添加抗CD3/CD28抗体或磁珠,避免过量导致细胞毒性。
若为偶联磁珠的试剂盒,需注意磁场分离强度和时间,避免磁珠残留。
二、培养条件控制
培养基选择
使用无血清培养基或含指定血清的培养基,避免未知成分干扰。
添加IL-2等细胞因子时需严格按照推荐浓度(如100-200IU/mL)。
环境参数
培养温度:37℃恒温。
CO₂浓度:5%(维持培养基pH稳定)。
湿度:饱和湿度,避免培养基蒸发。
培养时间与换液
初始激活时间一般为3-7天,避免过度活化导致细胞衰竭。
每2-3天半量换液,清除代谢废物(如乳酸、尿素),补充新鲜培养基和IL-2。
三、细胞状态监控
细胞活力检测
每日观察细胞形态(活化后的T细胞应呈簇状生长,体积增大)。
使用台盼蓝或PI染色检测存活率,要求活细胞比例>90%。
污染防控
若出现培养基浑浊、pH骤变或细胞大量死亡,立即终止实验并排查污染源。
四、安全性与合规性
生物安全
涉及人源性细胞时,需遵循生物安全等级规定。
锐器(如针头)及时弃入锐器盒,避免针刺伤。
试剂管理
抗体、细胞因子等蛋白类试剂避免反复冻融,分装后单次使用。
过期或变质试剂(如沉淀、变色)禁止使用。
伦理与记录
若涉及人类样本,需取得知情同意并符合伦理委员会要求。
详细记录实验条件(如细胞来源、试剂批号、操作时间),便于结果追溯。
五、特殊注意事项
自身免疫性疾病样本
如来自红斑狼疮、HIV患者的T细胞,需额外防护(如二级生物安全柜操作)。
后续应用适配
若用于CAR-T制备,需确保激活后细胞满足转导或编辑要求(如高活性、低凋亡)。
避免使用含动物成分的试剂(如胎牛血清),以免影响临床转化。
内毒素控制
所有溶液需测试内毒素水平(<0.5EU/mL),避免细胞焦亡。