一步法ELISA试剂盒，E. coli Host Cell Proteins OneStep ELISA Kit。一步法ELISA试剂盒将所有试剂（标准品、检测抗体、底物、终止液等）和待测样本恢复至室温（20-25℃），确保标准品和样本做复孔以增加可靠性。

E. coli host cell proteins （HCP） constitute a diverse and functionally intricate group of macromolecules within the Escherichia coli cell. The host proteins of E. coli play crucial roles in various cellular processes. These proteins are involved in fundamental metabolic pathways such as glycolysis, the tricarboxylic acid cycle, and amino acid biosynthesis, which are essential for the survival and growth of the bacterium. Recombinant expression in E. coli is a simple and cost-effective method for producing certain proteins. These proteins, often used as therapeutic agents, must be highly purified. The manufacturing process may introduce contamination by HCPs from E. coli, which can reduce efficacy and cause adverse reactions. Therefore, minimizing HCP impurities is crucial. This simple, sensitive, and fast OneStep ELISA is a powerful method for optimizing purification processes, process control, routine quality control, and product release testing.
 

一步法ELISA试剂盒使用过程如下：  

试剂与样本准备  

将所有试剂（标准品、检测抗体、底物、终止液等）和待测样本恢复至室温（20-25℃），确保标准品和样本做复孔以增加可靠性。  

样本处理：  

血清/血浆：3000rpm离心10分钟，取上清；避免溶血。  

细胞培养上清：1000rpm离心5分钟，取上清。  

组织匀浆：按1:9重量体积比加入PBS（含蛋白酶抑制剂），冰上研磨后5000×g离心5-10分钟，取上清。  

加样与孵育  

从铝箔袋中取出所需板条，剩余板条密封放回4℃。  

设置标准品孔、样本孔和空白孔：  

标准品孔：加入不同浓度标准品50μL。  

样本孔：加入待测样本50μL（或先加10μL样本+40μL稀释液）。  

空白孔：不加任何液体。  

除空白孔外，所有孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃恒温箱或水浴锅避光孵育60分钟。  

洗涤  

弃去液体，每孔加满洗涤液（350μL），静置20秒后甩去，吸水纸上拍干，重复洗涤5次（可用洗板机设置浸泡30秒程序提高精度）。  

显色与终止  

每孔加入底物A和B各50μL（或按1:1混合后加100μL），37℃避光孵育15分钟。  

每孔加入终止液50μL，轻轻晃动混匀，溶液颜色由蓝色变为黄色。  

结果测定  

在15分钟内使用酶标仪于450nm波长处测定各孔吸光度（OD值）。  

以标准品浓度为横坐标、OD值为纵坐标绘制标准曲线，通过回归方程计算样本浓度（若样本稀释，需乘以稀释倍数）。  

一步法ELISA试剂盒关键的注意事项：  

温度控制：所有试剂和样本需平衡至室温，孵育温度严格控制在37℃。  

避免交叉污染：加样时使用干净枪头，洗板时防止液体溅出。  

钩状效应：高浓度样本需稀释后重测，避免因抗原过剩导致假阴性。  

试剂保存：未用完的板条密封放回4℃，试剂盒避光保存于2-8℃。