一步法ELISA试剂盒，Mouse TNF-α OneStep ELISA Kit（S0C3023） 是斯达特生物提供的一种高品质ELISA试剂盒，专为满足科研工作者在细胞生物学、免疫学和炎症研究等领域的实验需求而设计。

斯达特生物致力于为科研工作者提供高质量的试剂盒产品和专业的技术支持。选择我们的Mouse TNF-α OneStep ELISA Kit（S0C3023），您将获得可靠的实验结果和优质的售后服务，助力您的科研工作顺利进行。

关于斯达特(Starter)，国产抗体专家：
杭州斯达特志在为全球生命科学行业提供优质的抗体、蛋白、试剂盒等产品及研发服务。依托多个开发平台：重组免单抗、重组鼠单抗、快速鼠单抗，重组蛋白开发平台 (E.coli,CHO,HEK293,InsectCells)，已正式通过欧盟98/79/EC认证ISO9001认证ISO13485.

一步法ELISA试剂盒因操作简便、耗时短，广泛应用于抗原/抗体检测，但实验过程中的细节把控直接影响结果准确性。以下是使用时的核心注意事项，涵盖操作前、操作中及操作后全流程：  

一、操作前准备注意事项  

试剂盒与样本准备  

试剂盒储存：严格按照说明书温度储存（通常2-8℃，部分试剂需-20℃冷冻），避免反复冻融（尤其是酶结合物、标准品），取出后需在室温（20-25℃）平衡30-60分钟，确保各试剂温度一致，减少误差。  

试剂检查：使用前核对试剂盒批号、有效期，观察试剂是否浑浊、沉淀或变色（如酶结合物应为澄清液体，显色底物A/B液若发黄可能失效），包装破损或异常试剂禁止使用。  

样本处理：  

血清、血浆样本需避免溶血（红细胞破裂释放过氧化物酶会干扰显色），离心后取上清，避免脂血、纤维蛋白凝块。  

组织匀浆、细胞培养液等样本需按说明书处理（如稀释、离心），确保无颗粒杂质，必要时用0.22μm滤膜过滤。  

样本应新鲜检测，若需保存，需分装后-20℃或-80℃冷冻，避免反复冻融（建议≤3次）。  

实验器材与环境  

耗材选择：使用配套96孔板（不可混用不同批次板条，吸附性能可能差异），移液器需校准（推荐使用可调式移液器，吸头一次性使用，避免交叉污染）。  

环境控制：实验温度保持20-25℃（温差过大影响反应效率），避免阳光直射、通风过强或振动（如靠近离心机），实验台需清洁干燥，准备吸水纸、计时器。  

二、操作过程关键注意事项  

加样操作  

顺序与量：一步法需同时加入样本和酶结合物（或按说明书特定顺序），加样时沿孔壁缓慢加入，避免产生气泡（气泡会导致读数偏低），若有气泡用针头挑破。  

避免交叉污染：每加完一个样本/试剂需更换吸头，加样后轻敲板边缘使液体混匀，切勿剧烈震荡（防止液体溅出污染相邻孔）。  

标准品与质控：标准品需按说明书梯度稀释（稀释液必须专用，不可用蒸馏水替代），每个浓度做复孔（通常2-3孔），同时设置空白对照（仅加显色剂和终止液）和阴性/阳性对照，确保实验有效性。  

温育控制  

严格按照说明书时间和温度温育（如37℃孵育30分钟），建议使用恒温箱（避免用室温替代，温度波动会导致结果偏差），温育时需加盖板膜（防止蒸发浓缩或污染），板条应水平放置，确保液体覆盖孔底。  

温育结束后及时取出，避免超时（可能导致非特异性结合增加，背景升高）。  

洗涤步骤  

洗涤是减少背景的关键：使用专用洗涤液（按比例稀释，避免用水替代），通过洗板机或手动加样，每孔加液量需超过孔容量1/2（如每孔加300μL），浸泡30-60秒后弃去，重复3-5次（次数不足易残留游离抗原/抗体，导致假阳性）。  

洗涤后需在吸水纸上拍干（切勿倒扣用力甩动，防止液体残留交叉污染），确保孔内无可见液滴。  

显色与终止  

显色剂A、B需按比例混合（或分别加入），加样后轻轻混匀，避光显色（部分底物对光敏感），严格控制显色时间（如15分钟），观察到标准品梯度显色明显后及时终止。  

终止液（通常为硫酸）需缓慢加入（避免剧烈反应导致液体溅出），加样顺序与显色剂一致，终止后轻轻震荡混匀，确保颜色由蓝色（TMB底物）变为黄色，若仍为蓝色可能终止不全。  

三、检测与数据处理注意事项  

读数时机：终止后10-30分钟内用酶标仪读数（超过1小时可能因颜色消退导致结果偏低），选择正确波长，读数前确保孔内无气泡、液体澄清（若有沉淀需离心后取上清）。  

结果判断：  

复孔OD值差异应≤10%，否则需重新检测。  

空白对照OD值应≤0.1（超过则可能试剂污染或洗涤不当），阴性对照OD值需低于临界值，阳性对照需高于临界值，否则实验无效。  

计算结果时需扣除空白对照OD值，按标准曲线计算样本浓度，避免仅凭肉眼判断颜色深浅。  

四、操作后注意事项  

试剂处理：剩余试剂需按原条件储存（如酶结合物放回2-8℃，显色剂避光保存），板条未用完部分需密封后2-8℃保存，标记使用日期。  

废弃物处理：终止液含强酸，需中和后再倒入下水道，废弃吸头、板条按生物废弃物处理，避免接触皮肤。  

记录与追溯：详细记录实验日期、试剂批号、温育时间、仪器型号等信息，便于结果追溯和问题排查。